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微量移液器（micropipet）是進(jìn)行生化實(shí)驗(yàn)或分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的*工具，然而使用方法的正確與否，以及微量移液器的準(zhǔn)確性，都直接影響了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的正確性，故請(qǐng)對(duì)你持有之微量移液器作深入的認(rèn)識(shí)。本實(shí)驗(yàn)室所使用的微量移液器為GilsonPipetmanP系列，包括P1000,P200,P20等。以下使用方法及注意事項(xiàng)，部份取材自原廠(chǎng)所附說(shuō)明書(shū)，請(qǐng)?jiān)斪x之后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。1）請(qǐng)參照?qǐng)D1.1，認(rèn)識(shí)微量移液器每一部份組件之位置及名稱(chēng)。2）將D（ejector）取下，C（connectingn...
儀器用具：迷你電泳槽及鑄膠器（MupidII）；UVtransilluminator及影像分析系統(tǒng)；防護(hù)面罩藥品試劑：瓊脂糖粉末（agarose,lowEEO）1×TAE電泳緩沖液（40mMTris-acetate,1mMEDTA,pH8.0）：由50×TAE（每1L含242gTrisbase,57.1mLglacialaceticacid,100mL的0.5MEDTA-8.0）稀釋使用。10×追蹤染劑（0.25%bromophenolblue,0.25%xylenecyan...
儀器用具：37℃及65℃水浴或恒溫槽藥品試劑：質(zhì)體pBluescriptIISK（-）限制酶：BamHI,PvuII及ScaI（濃度均為10units/μL,Invitrogen）10×Reactionbuffer6（0.5MTris-HCl,pH7.4;60mMMgCl2;0.5MNaCl;0.5MKCl）無(wú)菌水方法步驟：1）取7支微量離心管，依下表所列體積（單位μL）依序加于管壁不同位置上?！裘看挝∠拗泼笗r(shí)，請(qǐng)換一支新的微量移液器頭以免造成污染?？傮w積為20μL，短暫離...
方法步驟：1）前一天轉(zhuǎn)形的培養(yǎng)皿，當(dāng)菌落長(zhǎng)至約0.5mm大小時(shí)，將培養(yǎng)皿移至4℃放置1h。2）準(zhǔn)備一張無(wú)菌的硝化纖維濾膜，以鉛筆在邊緣標(biāo)上組別。◆請(qǐng)戴手套后再拿取濾膜！3）打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋子，以?xún)芍П馄借囎訉V膜兩邊夾住，輕輕覆蓋在菌落上方，盡可能避免有氣泡產(chǎn)生。◆注意！濾膜覆蓋上去后就不要再移動(dòng)！4）等濾膜*濕透后，以針頭在濾膜邊緣戳洞做記號(hào)（至少做三個(gè)記號(hào)）。小心把濾膜掀起，菌落朝上放置在LB/Amp/IPTGplate上。蓋上蓋子，在37℃培養(yǎng)2~4h，以誘導(dǎo)啟動(dòng)T5pro...
儀器用具：平端鑷子藥品試劑：Nitrocellulose濾膜LB/Amp/IPTG/X-Glucplate（LBplate添加100μg/mLampicillin,0.2MIPTG,50μg/mLX-Gluc）方法步驟：1）前一天進(jìn)行轉(zhuǎn)形的培養(yǎng)皿，當(dāng)菌落長(zhǎng)至約0.5mm大小時(shí)，將培養(yǎng)皿移至4℃放置至少1h。2）準(zhǔn)備一張無(wú)菌的硝化纖維濾膜，以鉛筆在邊緣標(biāo)上組別?！粽?qǐng)戴手套后再拿取濾膜！3）打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋子，以?xún)芍П馄借囎訉V膜兩邊夾住，輕輕覆蓋在菌落上方，盡可能避免有氣泡產(chǎn)生。◆...
方法步驟：1）吸取20μL的蛋白質(zhì)樣本，小心注入微量滴定盤(pán)中，避免氣泡產(chǎn)生。2）每一樣品槽加入200μL基質(zhì)液，混合均勻；可用燒熱的接種環(huán)去除氣泡。3）靜置約1~2min，顏色開(kāi)始加深，然后加入30μL終止液。反應(yīng)時(shí)間的長(zhǎng)短，要以樣本中的酶活性大小來(lái)做調(diào)整。因?yàn)槲覀冎粶y(cè)定色析法各分劃的相對(duì)酶活性，因此并不加終止液。4）以ELISA光度計(jì)測(cè)定波長(zhǎng)415nm的吸光值。酶活性單位的測(cè)定：a.以上步驟，只可測(cè)定GUS活性的相對(duì)大小，對(duì)色析法所得到的各個(gè)分劃進(jìn)行偵測(cè)，相當(dāng)方便，但并非酶...
方法步驟：1）尿素洗過(guò)夜的轉(zhuǎn)印紙?jiān)僖?0mLPBST洗三次，每次約10min，均在上述方形培養(yǎng)皿中進(jìn)行。2）轉(zhuǎn)印紙放在明膠NET溶液中反應(yīng)，置室溫中反應(yīng)1h。一般使用方形培養(yǎng)皿當(dāng)容器，但亦可裝入塑料袋中反應(yīng)，較節(jié)省試劑用量。3）反應(yīng)后，以PBST浸洗二次。4）把轉(zhuǎn)印紙放在抗體溶液中反應(yīng)，置室溫反應(yīng)1h。5）反應(yīng)后以PBST洗三次，改用酶聯(lián)體反應(yīng)，在室溫下反應(yīng)1h。6）以PBST洗四至五次，注意容器也要洗干凈。7）加入DAB基質(zhì)溶液約10mL呈色，盡量避光，并且不時(shí)搖動(dòng)呈色液。...
[方法]1．配制4個(gè)50ulPCR反應(yīng)混合液，包含：●去離子水，35．5ul●20×dNTP（每種5mmol/L），2．5ul●10×Vent聚合酶緩沖液，5．0ul●LMB3引物（10pmol/ul），2．5ul●VL—NotI引物（10pmol/ul），2．5ul●scFV基因模板DNA（100ng），1ul●VentDNA聚合酶（2單位），1．0ul2．在有加熱蓋的熱循環(huán)儀內(nèi)，加熱反應(yīng)混合液到94℃5分鐘。3．以94℃1分鐘、42℃1分鐘、72℃2分鐘的條件共循環(huán)30次...
當(dāng)前位置：
