技術(shù)文章
Technical articles
裂解酵母菌的方法是將玻璃微珠和菌細(xì)胞一起渦旋振蕩進(jìn)行機(jī)械破碎。此法充分利用玻璃微珠的快速轉(zhuǎn)動撞擊酵母菌從而機(jī)械破碎裂解酵母細(xì)胞。由此可見，這是一種強有力的裂解方法，但在裂解過程中又傳輸大量的能量，導(dǎo)致樣本的變性。因此，和哺乳動物細(xì)胞的研究比較，酵母菌的免疫沉淀試驗并不是一個好的方法，特別是研究蛋白質(zhì)的性質(zhì)和結(jié)構(gòu)時，該方法是不可取的。1．準(zhǔn)備工作由于免疫沉淀有多個步驟，且包括數(shù)小時孵育，因此在實驗開始前必須安排好時間，注意適當(dāng)利用過夜孵育的間隙。這將有助于決定何時開始裂解細(xì)胞。...
目前，我國流行的主要是乙型腦炎和森林腦炎。而在世界各地還有不同類型的病毒性腦炎流行，其病原體為各種不同的蟲媒病毒，如屬于A組病毒的東方馬腦炎、西方馬腦炎；屬于B組病毒的圣路易腦炎、波瓦生腦炎、蘇格蘭腦炎等。波瓦生腦炎波瓦生腦炎是由波瓦生腦炎病毒引起的，經(jīng)蜱傳播的中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的自然疫源性疾病。潛伏期7—14d。起病急，持續(xù)高熱、頭痛，隨之出現(xiàn)中樞神經(jīng)癥狀及腦膜刺激征，部分病例出現(xiàn)肢體強直或偏癱。病死率高達(dá)50％，發(fā)病以兒童多見。本病分布于加拿大、美國和北歐，多發(fā)生于夏秋季，...
病毒性出血熱（viralhemorrhagicfever，VHF）是指由多種RNA病毒引起，經(jīng)嚙齒動物或節(jié)肢動物傳播的一組臨床綜合征，微血管損害和滲透性增加為本組疾病的基本病變，肝、心、腦、腎等器官也可受累，發(fā)熱、肌痛、出血為臨床特征。不同病種間病死率差異很大。[病因?qū)W]引起病毒性出血熱的是多種RNA病毒，其中腎綜合征出血熱和漢坦病毒肺綜合征由漢坦病毒屬病毒引起；立夫特山谷熱由白蛉熱病毒屬病毒引起；克里米亞—剛果出血熱由納羅病毒屬病毒引起；拉沙熱、阿根廷出血熱和玻利維亞出血熱...
用于染色的培養(yǎng)細(xì)胞既可以是貼壁細(xì)胞，也可以是懸浮細(xì)胞。貼壁細(xì)胞通常使其生長在合適的固相支持物上；懸浮細(xì)胞可以直接固定，也可以通過甩片或使用化學(xué)黏合劑黏附在固相支持物上。（一）貼壁細(xì)胞貼壁細(xì)胞的準(zhǔn)備比較簡單，可以使其生長于適當(dāng)?shù)妮d玻片、蓋玻片或塑料組織培養(yǎng)皿中。如果實驗要求高分辨率或需拍照，細(xì)胞應(yīng)生長于載玻片或蓋玻片上；如果實驗的分辨率要求不高，或者是大量樣品的篩選，可使細(xì)胞生長于塑料組織培養(yǎng)皿中。將貼壁細(xì)胞生長在固相支持物上有其*的優(yōu)點，操作步驟，如沖洗、固定、通透及染色均較...
處理懸浮細(xì)胞的一個簡單辦法是在固定細(xì)胞之前把細(xì)胞黏附在固相支持物上。方法之一是使用甩片機(jī)。細(xì)胞在固定之前，用特殊的離心方法將細(xì)胞甩至載玻片上。需要注意的是離心力可使細(xì)胞壓癟并擴(kuò)張，使抗體更容易結(jié)合細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，但也輕微扭曲了正常的細(xì)胞結(jié)構(gòu)。1．所需溶液和儀器PBS及甩片機(jī)。2．操作步驟（1）用PBS洗滌細(xì)胞（400r/min2X106／m1；離心5min），并重懸于PBS中。調(diào)整濃度至1～（2）將顯微鏡載玻片固定于甩片機(jī)的轉(zhuǎn)頭上，然后加入0．1—0．5ml細(xì)胞懸液；（3）迅速...
[器材和試劑]●包被緩沖液●PBST●PBBST[PBS，1％TritonX—100，3％BSA（Sigma）]●兔抗人Fc—特異性IgG（Pierce）：用包被緩沖液稀釋為5．0ug/ml①●HRP標(biāo)記的抗噬菌體抗體（AmershamBiosciences）：用封閉液以1/10000比例稀釋●顯色液[3，3’，5，5’—四甲基聯(lián)苯胺（TMB）液體底物系統(tǒng)，Sigma][方法]1．將200ul兔抗人Fc—特異性IgG等量分加到各孔中。4℃孵育過夜。2．用PBST洗滌多孔板。3...
每一輪的親和選擇包括原始的或富集的gⅥ—cDNA文庫中噬菌粒顆粒的獲取和純化以及它們自身的淘選過程。介紹兩種不同的方法來抽提特異的噬菌體。1噬菌體文庫的獲取和純化在每輪淘選循環(huán)中的起始部分，（富集的）Topl0F，細(xì)胞經(jīng)輔助噬菌體被雙重感染以便產(chǎn)生和純化gⅥ—cDNAt噬菌粒顆粒，從而進(jìn)行下一輪的淘選。在淘選過程中，如果沒有特異的緩沖液且噬菌體對誘餌的親和力較高（如免疫親和篩選），此時經(jīng)雙重感染獲得的噬菌體顆粒并不一定要純化。2生物素化的誘餌的制備用不同的配體標(biāo)準(zhǔn)化淘選的一個...
蛋白酶分類作用位點已知抑制物氨基肽酶金屬蛋白酶帶有自由氨基的L-氨基酸氨基末端；不能分解由X-Pro、·D或·Q組成的肽鍵2，2，雙吡啶，1．1（）-菲咯啉菠蘿蛋白酶巰基蛋白酶無特異性α2巨球蛋白，TPCK，TLCK，烷化羧肽酶A鋅金屬蛋白酶帶有自由氨基酸的L—氨基酸羧基端；不能分解R、P或羥脯氨酸EDTA，EGTA羧肽酶B鋅金屬蛋白酶K，R羧基端EDTA，EGTA，堿性氨基酸羧肽酶Y絲氨酸羧肽酶氨基酸羧基端PMSF組織蛋白酶C琉基蛋白酶氨基端雙肽，可通過K，R或P氨基端作為...
當(dāng)前位置：
